室温15 min后冲净，加DAB显色液8分钟后洗净显色。用中性树胶及盖玻片封片，置于显微镜下观察染色情况。

（4）统计分析。所得数据采用 ±s表示，用软件SPSS 13.0程序进行分析，统计方法采用单因素方差分析和t检验。P<0.05有统计学意义。

三、进度安排：

1．复制慢性酒精成瘾动物模型 1.5个月。

2．制备海马组织切片 2个月。

3．免疫组织化学分析 3个月。

4．统计分析及结果讨论 1个月。

四、预期结果：

1. 慢性酒精暴露可以影响神经发生中增殖、迁移、分化、存活中的任一时期。慢性酒精暴露会影响海马神经发生，使海马神经发生降低，干细胞形成胶质细胞数量减少，使海马颗粒下区细胞增殖减少，会增加神经元变性，干预分化中的神经元的存活。

2．因此，相比于对照组，慢性酒精暴露组可能会出现：抗 nestin和抗GFAP-δ染色的神经干细胞数量减少。而戒断后，去除干扰因素，神经发生会出现一定的恢复，故酒精戒断组中，染色情况相比于对照组，会稍浅，而相比于慢性酒精暴露组染色稍深。

五、参加课题研究的学生情况